Nøkkelforskjell - T4 vs T7 DNA Ligase
DNA-ligase er et viktig enzym som brukes i molekylærbiologiske teknikker. Det fungerer som et molekylært lim for å sammenføye nukleotider ved å danne fosfodiesterbindinger mellom nukleotider. Fosfodiesterbindinger dannes mellom 3'-hydroksylenden av sukkerdelen og 5'-endefosfatgruppen. DNA-ligase er viktig i replikasjonsprosessen for å bli med Okazaki-fragmentene av den hengende strengen og under DNA-reparasjonsmekanismer og in vitro-kloningseksperimenter for å bli med det ønskede genet av interesse for vektorgenomet. Det er to hoved-DNA-ligaser som for tiden brukes av molekylærbiologer: T4- og T7-DNA-ligaser. T4 DNA-ligase er et av de første enzymene som ble isolert fra T4-bakteriofagen. T7 DNA ligase, som er et mindre protein, er et enzym isolert fra T7 bakteriofag. Dette er nøkkelforskjellen mellom T4 og T7 DNA ligaser.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er virkningen av DNA-ligase
3. Hva er T4 DNA-ligase
4. Hva er T7 DNA-ligase
4. Likheter mellom T4 og T7 DNA-ligase
5. Sammenligning side om side - T4 vs T7 DNA-ligase i tabellform
6. Sammendrag
Hva er virkningen av DNA-ligase?
DNA-ligering skjer i en tretrinnsreaksjon. Det første trinnet er et nukleofilt angrep på alfa-fosfor av ATP og genererer et kovalent enzym-adenylat-mellomprodukt der AMP er koblet til det terminale sidekjedene av lysin. I det andre trinnet oppstår et nukleofilt angrep på fosforet av enzymet adenylat av det 5'-fosfatavslutte DNA-substratet, frigjør lysin og danner DNA-adenylat. I det siste trinnet blir DNA-adenylat angrepet av 3'-OH av en annen DNA-streng, frigjør AMP og forbinder polynukleotidene.
Hva er T4 DNA ligase?
T4 Ligase var den første ligasen som ble isolert og identifisert av Meselson, Weigle og Kellenberger, og var den første kommersielle ligasen som noensinne ble produsert. T4 DNA-ligase er et ATP-avhengig enzym som katalyserer dannelsen av fosfodiesterbindingen. Det er en enkelt polypeptidkjede med 487 aminosyrerester og har en molekylvekt på ca. 77 kDa. Den optimale pH-verdien for dens aktivitet ligger i området 7,5 - 8.
Figur 01: T4 DNA-ligase
T4 DNA-ligase, som navnet antyder, er til stede i bakteriofag T4 og ble isolert når fag produserte enzymet ved infeksjon med E. coli. Enzymet ligater dobbeltstrengede DNA-duplekser med stumpe ender, og fragmentene som skal bindes, bør være i nærheten av hverandre.
Hva er T7 DNA ligase?
T7 ligase er 41 kDa protein produsert av T7 Bakteriophage og isoleres ved å infisere E. coli celler. Hovedfunksjonen til T7-ligase er å ligere DNA-duplekser gjennom fosfodiesterbindinger og bli med nærliggende fragmenter av DNA under kloningseksperimenter. Den optimale pH-verdien for T7 DNA-ligase ligger i området 7,0 - 7,2. T7 ligase er ATP-avhengig. T7 DNA ligaser er også i stand til å annealing DNA og RNA hybrider, noe som gir opphav til unormale konformasjoner under transkripsjon; imidlertid er dette fenomenet fortsatt under forskning av in vitro-studier.
Hva er likhetene mellom T4 og T7 DNA-ligase?
- T4 og T7 DNA ligase deltar i en ligeringsreaksjon ved annealing av DNA-duplekser gjennom dannelse av fosfodiesterbinding mellom 3'OH-enden og 5'-fosfatenden av DNA-fragmentet.
- Begge enzymene ligater DNA-duplekser med stumpe slutt som er i nærheten av hverandre.
- Begge enzymene er ATP-avhengige.
- Disse enzymene isoleres ved å infisere E. coli celler med den spesielle bakteriofagen.
-
Anvendelser av begge enzymer inkluderer:
- Molekylær kloning - for å ligere genet av interesse for vektoren
- DNA-reparasjon - for å reparere dobbeltstrengede nisjer
- In vitro DNA-replikasjon
- Ligase kjedereaksjon
Hva er forskjellen mellom T4 og T7 DNA ligase?
Diff Article Midt før tabell
T4 vs T7 DNA ligase |
|
| T4 DNA Ligase type DNA ligase isolert fra bakteriofagen T4 og er involvert i ligering av tilstøtende DNA-fragmenter via dannelse av fosfodiesterbinding. | T7 DNA ligase type DNA ligase isolert fra bakteriofagen T7 og er involvert i ligering av tilstøtende DNA-fragmenter via dannelse av fosfodiesterbindinger. |
| Proteinens størrelse | |
| Størrelsen på T4 DNA ligase er 77 kDa - større sammenlignet med T7 DNA ligase. | Størrelsen på T7 DNA ligase er 41 kDa. |
| Optimal pH | |
| pH-området som fungerer T4 DNA ligase er 7,5 - 8,0. | pH-området som fungerer T7 DNA ligase er 7,0 - 7,2. |
Sammendrag - T4 vs T7 DNA Ligase
DNA-ligaser er en viktig klasse av enzymer som er involvert i molekylær kloning for å produsere rekombinante DNA-molekyler som inneholder genet av interesse. Ligasjonsreaksjon er en energiutnyttende reaksjon, og det pågår nye forskningsstudier for å forbedre nøyaktigheten ved å modulere tilgjengelige ligaser. T4 og T7 DNA ligaser er to typer viktige DNA ligase enzymer som brukes i molekylærbiologiske teknikker. T7 DNA ligase er også et resultat av forskning som var basert på den primære ligasen isolert fra T4-infisert E. coli. T7 er skildret mer effektivitet og nøyaktighet i å utføre funksjonen på grunn av sin mindre størrelse. Dette er forskjellen mellom T4 og T7 ligase.
Last ned PDF-versjon av T4 vs T7 DNA Ligase
Du kan laste ned PDF-versjonen av denne artikkelen og bruke den til frakoblede formål i henhold til sitater. Last ned PDF-versjon her Forskjellen mellom T4 og T7 Ligase.
