Hovedforskjell - Stacking Gel vs Separating Gel
Begrepene stabling gel og skille gel brukes i å forklare SDS-PAGE teknikken. SDS-PAGE eller natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektroforese er en laboratorieteknikk som brukes til å skille proteinmolekyler basert på deres molekylvekt. Teorien bak teknikken er at proteiner med forskjellig molekylvekt viser forskjellige migrasjonshastigheter; molekyler med lav molekylvekt migrerer raskere mens molekyler med høy molekylvekt migrerer sakte. Medium for migrasjon er en gel. Det er to typer geler som heter stablingsgel og separeringsgel. Hovedforskjellen mellom stablingsgel og separeringsgel er at pH i stablegelen er 6,8, mens pH for separasjonsgel er 8,8.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er Stacking Gel
3. Hva er separasjonsgel
4. Forholdet mellom Stacking Gel og Separating Gel
5. Sammenligning side om side - Stacking Gel vs Separating Gel i tabellform
6. Sammendrag
Hva er Stacking Gel?
Stacking gel er en lavkonsentrert polyakrylamidgel som plasseres på toppen av mer konsentrert oppløsningsgel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknikk. Stabelgelen brukes til å forbedre oppløsningen av elektroforese. Oppløsningen øker på grunn av forskjellen mellom konsentrasjoner av stabling av gel og oppløsningsgel som påvirker proteinene i prøven. Siden konsentrasjonen av polyakrylamid i stablingsgel er lav, er porestørrelsen høyere. Dette hjelper også til å øke separasjonen.
Stabelgelen er en løs polyakrylamidgel med store porer på ca. 7% polyakrylamid. Disse porene fungerer ikke som en betydelig barriere for store proteinmolekyler. Derfor påvirker denne gelen litt på mobiliteten til disse proteinene. Dette skiller seg i henhold til mobiliteten og størrelsen på proteinet ved å konsentrere dem mellom to geler.
Figur 01: SDS-PAGE akrylamidgel
Stabilgelens pH er 6,8. Dens pH er sur enn for å oppløse gel med 2 pH-enheter. Denne pH innebærer en lavere ionestyrke, derav en høyere elektrisk motstand. Dette provoserer mobiliteten til proteiner enn andre ladede partikler som er tilstede i gelen.
Hva er separerende gel?
Separering av gel eller oppløsningsgel av en SDS-PAGE-teknikk er en høykonsentrert polyakrylamidgel som plasseres på toppen av lavkonsentrert stablingsgel. Separasjonsgelen inneholder en høy mengde polyakrylamid (10%). PH i denne gelen opprettholdes som pH = 8,8, noe som er et høyere pH-nivå enn stablingsgelens.
Figur 02: Et gelelektroforeseapparat
Når proteinmolekylene når separasjonsgelen, blir migrasjonen av disse molekylene bremset fordi separasjonsgelen er en gel med høy konsentrasjon med en liten porestørrelse som kan fungere som en betydelig barriere for bevegelsen av proteinmolekylene. Denne bremsingen gjør at de andre proteinene migrerer sakte for å ta igjen, noe som resulterer i et smalt, konsentrert bånd mellom de to gelene.
Hva er forholdet mellom stabling av gel og separerende gel?
Både Stacking Gel og Separating Gel-typer brukes i samme apparat
Hva er forskjellen mellom Stacking Gel og Separating Gel?
Diff Article Midt før tabell
Stacking Gel vs Separating Gel |
|
| Stacking gel er en lavkonsentrert polyakrylamidgel som plasseres på toppen av mer konsentrert oppløsningsgel (separeringsgel) i SDS-PAGE-teknikk. | Separering av gel eller oppløsningsgel av en SDS-PAGE-teknikk er en høykonsentrert polyakrylamidgel som plasseres på toppen av en lavkonsentrert stablingsgel. |
| Plassering | |
| Stacking gel plasseres på den oppløsende (separerende) gelen. | Separerende gel plasseres på bunnen av beholderen som brukes til gelelektroforese. |
| Konsentrasjon | |
| Konsentrasjonen av stablingsgel er høy. | Konsentrasjonen av separasjonsgel er lav. |
| Polyakrylamidinnhold | |
| Stacking gel inneholder ca. 7% polyakrylamid. | Separerende gel inneholder ca. 10% polyakrylamid. |
| pH | |
| Stabilgelens pH er 6,8. | Skillegelens pH er 8,8. |
| Porestørrelse | |
| Store porestørrelser er tilstede i stablingsgel. | Små porestørrelser er tilstede i separeringsgel. |
| Vedtak | |
| Stacking gel gir bedre oppløsning. | Å skille gel gir en dårlig oppløsning. |
Sammendrag - Stacking Gel vs Separating Gel
Stacking gel og separeringsgel er to typer polyakrylamidgeler som brukes til å få bedre separasjon av proteinmolekyler i en gitt prøve. Forskjellen mellom stablingsgel og separeringsgel er at pH i stablegelen er 6,8, mens pH på separeringsgel er 8,8.
