Hovedforskjell - Horisontal vs Vertikal Gelelektroforese
Gelelektroforese er en laboratorieteknikk som brukes i genetikk for å skille blandinger som inneholder DNA, RNA og andre proteiner i henhold til deres respektive ladning og molekylære størrelse. DNA, RNA eller proteiner som må skilles ut i denne metoden kjøres gjennom en gel som inneholder små porer. Molekylene drives gjennom gelen av et elektrisk felt. Molekylene går gjennom porene i gelen, og bevegelseshastigheten er omvendt proporsjonal med deres respektive lengder. Derfor vil molekyler med lavere molekylstørrelse bevege seg raskere enn molekyler med høyere molekylvekt. Det elektriske feltet genereres av ladningsforskjellen i to ender av gelen. Den ene enden inneholder en positiv ladning, og den andre enden inneholder en negativ ladning. Siden DNA- og RNA-molekyler er negativt ladet,de vil tiltrekkes mot den positivt ladede enden av gelen. Gelelektroforese kan ha to forskjellige metoder: horisontal gelelektroforese og vertikal gelelektroforese. I horisontal gelelektroforese er gelen til stede i en horisontal retning og er nedsenket i en kontinuerlig løpebuffer som er tilstede inne i selve gelboksen. I vertikal gelelektroforese er buffersystemet orientert vertikalt og er diskontinuerlig med to kamre på henholdsvis toppen og bunnen med en katode og en anode. Dette er nøkkelforskjellen mellom horisontal og vertikal gelelektroforese.gelen er til stede i horisontal retning og er nedsenket i en kontinuerlig løpebuffer som er tilstede inne i selve gelboksen. I vertikal gelelektroforese er buffersystemet orientert vertikalt og er diskontinuerlig med to kamre på henholdsvis toppen og bunnen med en katode og en anode. Dette er nøkkelforskjellen mellom horisontal og vertikal gelelektroforese.gelen er til stede i horisontal retning og er nedsenket i en kontinuerlig løpebuffer som er tilstede inne i selve gelboksen. I vertikal gelelektroforese er buffersystemet orientert vertikalt og er diskontinuerlig med to kamre på henholdsvis toppen og bunnen med en katode og en anode. Dette er nøkkelforskjellen mellom horisontal og vertikal gelelektroforese.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er horisontal gelelektroforese
3. Hva er vertikal gelelektroforese
4. Likheter mellom horisontal og vertikal gelelektroforese
5. Sammenligning side om side - Horisontal vs vertikal gelelektroforese i tabellform
6. Oppsummering
Hva er horisontal gelelektroforese?
Horisontal gelelektroforese bruker den grunnleggende teorien for separasjon av DNA, RNA eller proteinmolekyler i henhold til deres respektive molekylære størrelse og ladning. I denne teknikken er gelen til stede i horisontal retning og er nedsenket i en buffer som er kontinuerlig. Agarosegel brukes til å skille gelboksen i to rom. Den ene enden av gelboksen inneholder en anode, mens den andre enden inneholder en katode. Når en strøm påføres, tillater bufferen som brukes i denne teknikken, opprettelse av en ladningsgradient. Når ladningen påføres, har gelen en tendens til å varme seg opp. Bufferen fungerer også som kjølevæske som holder temperaturen på optimale nivåer. Resirkulering av løpebufferen forhindrer dannelsen av en pH-gradient. Et diskontinuerlig buffersystem kan ikke brukes i horisontal gelelektroforese siden de to avdelingene i gelsystemet blir koblet til den løpende bufferen. Akrylamid brukes under gelelektroforese for å skille proteinblandinger.
Figur 01: Horisontal gelelektroforese
Ved horisontal gelelektroforese kan akrylamid ikke brukes siden gelboksen er utsatt for oksygen. På grunn av tilstedeværelsen av oksygen inhiberes polymerisering av akrylamid, og dette forstyrrer dannelsen av gelen. Horisontal gelelektroforese er en uanstrengt metode som brukes ved separasjon av DNA og RNA.
Hva er vertikal gelelektroforese?
Vertikal gelelektroforeseteknikk fungerer i henhold til den primære teorien om gelelektroforese, men det anses å være mer komplisert enn horisontal gelelektroforesemetode. Denne teknikken bruker en diskontinuerlig buffer. En katode er plassert i det øverste kammeret, og anoden er plassert i det nedre kammeret. Elektrodene i hvert rom gir det nødvendige elektriske feltet. Et tynt lag gel helles mellom de to monterte glassplatene. Derfor er den øverste delen av gelen nedsenket i det øverste kammeret, og den nedre delen av gelen er nedsenket i kammeret i bunnen. Når strømmen er påført, beveger en liten del av bufferen seg til bunnkammeret fra toppkammeret gjennom gelen. Strømmen som brukes i denne teknikken er små enheter.
Figur 02: Vertikal gelelektroforese
I vertikal gelelektroforese strømmer buffer bare gjennom gelen. Dette tillater nøyaktig kontroll av spenningsgradienten under separasjonstrinnet. Akrylamidgel kan brukes siden avdelingene ikke utsettes for atmosfærisk oksygen. På grunn av den mindre porestørrelsen på akrylamidgel, kan presis separasjon oppnås med en høyere oppløsning.
Hva er likhetene mellom horisontal og vertikal gelelektroforese?
- Begge systemene fungerer i henhold til den grunnleggende teorien om gelelektroforese.
- Anode og katode brukes til å gi det nødvendige elektriske feltet i begge systemene.
Hva er forskjellen mellom horisontal og vertikal gelelektroforese?
Diff Article Midt før tabell
Horisontal vs vertikal gelelektroforese |
|
| Horisontal gelelektroforese er en gelelektroforeseteknikk der gelen er til stede i horisontal retning. | Vertikal gelelektroforese er en gelelektroforeseteknikk der gelen er orientert vertikalt. |
| Buffer | |
| Horisontal gelelektroforese består av en kontinuerlig buffer. | Den løpende bufferen er diskontinuerlig i vertikal gelelektroforese. |
| Bruk av akrylamid | |
| Akrylamid kan ikke brukes til horisontal gelelektroforese siden gelboksen er utsatt for atmosfærisk oksygen. | Siden gelen ikke er utsatt for atmosfærisk oksygen på grunn av to separate kamre, kan akrylamid brukes til vertikal gelelektroforese. |
| Funksjon | |
| Horisontal gelelektroforese brukes oftere til separering av DNA- og RNA-blandinger, men ikke proteiner. | Vertikal gelelektroforese brukes til å skille blandinger av protein. |
Sammendrag - Horisontal vs vertikal gelelektroforese
Gelelektroforese er laboratorieteknikk som er mye brukt i separasjonen av blandinger som inneholder molekyler av DNA, RNA og proteiner. Det er to metoder for gelelektroforese: horisontal og vertikal gelelektroforese. I horisontal gelelektroforese er løpebufferen kontinuerlig, mens den i vertikal gelelektroforese er diskontinuerlig. Dette er forskjellen mellom horisontal og vertikal gelelektroforese. Begge systemene fungerer i henhold til det vanlige prinsippet om gelelektroforese.
Last ned PDF-versjon av Horisontal vs Vertikal Gelelektroforese
Du kan laste ned PDF-versjonen av denne artikkelen og bruke den til frakoblede formål som angitt i en henvisning. Last ned PDF-versjon her Forskjellen mellom horisontal og vertikal gelelektroforese.
