Hovedforskjell - SDS-side vs Western Blot
Western blotting er en teknikk som oppdager et spesifikt protein fra en proteinprøve. Denne teknikken utføres via flere viktige trinn: gelelektroforese, blotting og hybridisering. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS Page) er en slags gelelektroforeseteknikk som brukes til å skille proteiner i henhold til deres størrelse (molekylvekt). Western blot er et spesialark av en blottingmembran som brukes til å overføre samme mønster av proteinene i SDS-siden. Hovedforskjellen mellom SDS Page og western blot er at SDS Page tillater separasjon av proteiner i en blanding mens western blot tillater påvisning og kvantifisering av et spesifikt protein fra en blanding. Begge er nyttige i proteinanalysestudier.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er SDS Side
3. Hva er Western Blot
4. Sammenligning side om side - SDS Page vs Western Blot
5. Sammendrag
Hva er SDS-siden?
SDS Page er en gelelektroforeseteknikk som brukes til proteinseparasjon. Det brukes ofte i biokjemi, genetikk, rettsmedisin og molekylærbiologi. Når proteinene er ekstrahert fra prøven, kjøres de på en gel bestående av SDS og polyakrylamid. SDS er et anionisk vaskemiddel som brukes til å linearisere proteiner (denatureringsproteiner) og for å gi en negativ ladning til lineariserte proteiner proporsjonalt med deres molekylvekt. Polyakrylamid blir den faste støtten for gelen. Denaturerte proteiner som er negativt ladede migrerer mot den positive enden av apparatet gjennom gelen. I henhold til størrelsen på proteinene varierer migrasjonshastighet mellom proteiner og separasjon oppstår. Derfor er SDS-siden nyttig for separasjon av individuelle proteiner basert på størrelsen.
Fremstillingen av polyakrylamidgel for fraksjonering av proteiner er et avgjørende trinn i SDS-siden. Den riktige konsentrasjonen av polyakrylamid og typen tverrbindingsmiddel som brukes, påvirker sterkt de fysiske egenskapene til gelen, noe som gjør den faktiske separasjonen av de forskjellige proteinene. Porestørrelsene på gelen skal håndteres ordentlig for effektiv separasjon. Imidlertid anses SDS Page som en høyoppløselig proteinseparasjonsteknikk.
SDS Page-teknikken har en stor begrensning i proteinanalyse. Siden SDS denaturerer proteiner før separasjon, tillater det ikke påvisning av enzymatisk aktivitet, proteinbindende interaksjoner, proteinkofaktorer osv.
Figur 01: SDS-side
Hva er Western Blot?
Western blotting-teknikk muliggjør påvisning av et spesifikt protein fra en proteinblanding og måling av mengden og molekylvekten til proteinet. Western blot er membranen som brukes under blottingprosedyren for å få speilbildet av proteinmønstrene i SDS-polyakrylamidgel. Membranen som brukes til western blotting består hovedsakelig av nitrocellulose eller polyvinyliden difluorid (PVDF). Membranen med det overførte proteinet kan brukes til å identifisere ønsket protein. Det krever antistoff av høy kvalitet for påvisning av ønsket protein ved hybridisering. Antistoffet binder seg til det spesifikke antigenet og avslører nærværet av det ønskede antigenet som er et protein.
Overføring av proteinene fra SDS polyakrylamidgel til western blot utføres ved elektroblotting. Det er en effektiv og rask metode som får proteinene til å elektroforese ut av gelen og passere over på nitrocellulosemembranen (western blot).
Figur 02: Western Blot
Hva er forskjellen mellom SDS-siden og Western Blot?
Diff Article Middle before Table
SDS-side mot Western Blot |
|
| SDS Page er en gelelektroforeseteknikk. | Western blot er en teknikk som utføres på en membran for å oppdage et spesifikt protein fra en blanding. |
| Bruk | |
| SDS-siden tillater separering av proteiner i henhold til størrelsene. | Western blot tillater overføring av proteiner på SDS-sidegelen uten å endre mønsteret og tillater hybridisering med spesifikke antistoffer. |
| Ulemper | |
| Protein denaturering, høye kostnader og tilstedeværelse av nevrotoksin kjemikalier er ulempene med denne teknikken. | Denne teknikken er tidkrevende og krever gode erfarne personlige og spesifikke kontrollerte forhold. |
Sammendrag - SDS Side vs Western Blot
SDS-side og western blot er to metoder involvert i proteinanalyse. SDS Page tillater enkel separering av proteiner på en gel i henhold til molekylvekten. Western blot hjelper til med å bekrefte tilstedeværelsen og mengden av et spesifikt protein gjennom hybridisering med spesifikke antistoffer. Dette er forskjellen mellom SDS Page og western blot.
