PCR vs PCR i sanntid
PCR eller Polymerase-kjedereaksjon er en revolusjonert oppdagelse i moderne molekylærbiologi, som først ble utviklet av kjemikeren Kary Mullis i 1983. Det gjør det mulig å amplifisere en enkelt sekvens i et komplekst DNA for analyse. Den grunnleggende ideen med PCR er at to primere, som er komplementære til de motsatte strengene i en DNA-sekvens, er orientert mot hverandre; grunningene produserer komplementære tråder, som hver inneholder den andre grunning. Derfor er resultatet en stor mengde av en sekvens som tilsvarer DNA som ligger mellom de to primerne. DNA-polymeraseenzym brukes til å utvide primerne i PCR. DNA-polymerase er et termostabilt enzym, og har evnen til å overleve i høye temperaturer (94 til 95 ° C) brukt til denaturering av mal-DNA.
PCR involverer tre trinn, nemlig gjentatte runder med denaturering, annealing av primere og syntese av DNA. En termosyklermaskin brukes til å utføre denne reaksjonen slik at den kan programmeres til å endre temperaturene raskt og nøyaktig. Anvendelser av PCR er kriminelle etterforskninger, DNA-fingeravtrykk, påvisning av patogener og analyse av DNA fra tidlige menneskearter.
Hva er konvensjonell PCR?
Det er tre hovedstadier av konvensjonell PCR, nemlig; DNA-amplifikasjonstrinn, separasjon av PCR og påvisning av produkter. Separasjon av DNA-segmenter gjøres vanligvis ved agarosegelelektroforese. Produktene blir deretter farget med etheiduimbromid. Til slutt oppnås deteksjon ved visualisering av bånd på geler under UV-lys. Derfor blir de endelige resultatene av konvensjonell PCR ikke uttrykt som tall. Vanligvis er den vanlige PCR bare i stand til å oppdage en enkelt parameter.
Hva er sanntids PCR?
Sanntids PCR kan oppdage forsterkning av produkter etter hvert som produktene syntetiseres. Med utviklingen av teknologi har PCR blitt en veldig populær teknikk, spesielt for påvisning og identifisering av bakterier i matvarer. Sanntids PCR bruker et fluorescerende fargestoffsystem og termosykler utstyrt med fluorescerende deteksjonsevne.
Hva er forskjellen mellom konvensjonell PCR og sanntids PCR?
• Konvensjonell PCR er mer tidkrevende ettersom den bruker gelelektroforese til å analysere de forsterkede PCR-produktene. I kontrast er sanntids PCR mindre tidkrevende, da det kan oppdage forsterkninger i de tidlige fasene av reaksjonen.
• PCR i sanntid samler inn data i den eksponensielle vekstfasen av PCR, mens tradisjonell PCR samler inn data ved reaksjonens sluttpunkt.
• Resultatene av konvensjonell PCR er kanskje ikke veldig presise, men resultatene av sanntids PCR er veldig presise.
• Sanntids PCR er mer følsom enn konvensjonell PCR.
• Konvensjonell PCR har veldig dårlig oppløsning mens PCR i sanntid kan oppdage svært små endringer på grunn av høy oppløsning.
• Sluttpunktdeteksjon av konvensjonell PCR har kort dynamisk område, mens sanntids PCR-deteksjon har bredt dynamisk område.
• I motsetning til konvensjonell PCR finnes automatiserte deteksjonsteknikker i sanntids PCR.
• Konvensjonell PCR er svært sofistikert og arbeidskrevende mer enn sanntids PCR.
• I motsetning til sanntids PCR, kan konvensjonell PCR ikke skille mellom døde og levende bakterier.
• Sanntids PCR bruker fluorescerende fargestoffsystem for å oppdage produktene mens konvensjonell PCR bruker etidiumbromid og UV-lys for å visualisere bånd i agarosegelmediet.
