Nøkkelforskjell - Varm vs kald trypsinisering
Varm og kald trypsinisering er to metoder som brukes i enzymatisk oppdeling av celler i dyrecelledyrking. Hovedforskjellen mellom varm og kald trypsinisering, som navnene antyder, avhenger av temperaturen der trypsin tilsettes for cellulær oppdeling. Varm trypsinisering finner sted under forhold med høyere temperatur (36,5 - 37 0 C), mens kald trypsinisering finner sted under lave temperaturforhold.
Under prosessen med primær cellekultur av dyreceller er det tre hovedmetoder som brukes og har vist seg å være vellykkede. De tre metodene inkluderer mekanisk oppdeling av celler, enzymatisk oppdeling av celler og den primære eksplantasjonsteknikken. Den enzymatiske oppdelingen av celler som fører til isolering av celler, og det gjøres av det proteinnedbrytende enzymet trypsin. Derfor er denne prosessen kjent som trypsinisering. Trypsinisering kan gjøres under to forskjellige forhold, nemlig varm trypsinisering og kald trypsinisering. Varm trypsinisering er metoden for å behandle cellene med trypsin under varme forhold ved en temperatur på 36,5 - 37 0C. Kald trypsinisering er prosessen med trypsinbehandling som foregår under kaldere forhold, fortrinnsvis i is som holder veldig lave temperaturer.
INNHOLD
1. Oversikt og
hovedforskjell 2. Hva er varm trypsinisering
3. Hva er kald trypsinisering
4. Likheter mellom varm og kald trypsinisering
5. Sammenligning side om side - Varm vs kald trypsinisering i tabellform
6. Oppsummering
Hva er varm trypsinisering?
Trypsinisering kan gjøres for å dele opp mobilkomponentene for å isolere cellene for å produsere en primær cellekultur. Trypsin er et proteinnedbrytningsenzym, og enzymblandingen som brukes i trypsinisering kan enten være et råekstrakt eller et renset produkt. Det rå ekstraktet sies å være mer effektivt når det gjelder proteinlysering og celledisintegrasjon ettersom det inneholder andre nedbrytende enzymer.
Varm trypsinisering er den mest brukte enzymatiske metoden for celleoppdeling som finner sted under høyere temperaturforhold. Før behandlingen ved trypsinisering hakkes ønsket vev i mindre biter. Det letter den enkle oppdelingsprosessen. Det hakkede vevet vaskes deretter i et spesielt medium kjent som Dissection Basal Salt medium.
Etter at vasketrinnet er fullført transformeres cellene til en kolbe som inneholder det aktive enzymet, som er trypsin. Ettersom denne teknikken innebærer en varm trypsiniseringsprotokoll, plasseres trypsinen ved en temperatur på rundt 37 ° C i omtrent fire timer.
Figur 01: Trypsin
Innholdet blandes og omrøres ved hjelp av sentrifugeringsmetoder for å gjøre det enkelt for protokollen og for å få raskere oppdelingsprosessen. Når anbefalt tid er oppnådd, kan cellene avledes fra supernatanten. Cellene avledet fra supernatanten inkuberes deretter ved en bestemt temperatur og tid.
Hva er kald trypsinisering?
Kald trypsinisering er den andre typen trypsinisering som foregår under kalde forhold. I denne teknikken blir cellene som blir hakket og vasket plassert i hetteglass på is og deretter dynket med trypsin. Bløtleggingsperioden er mye lengre - omtrent 6 - 24 timer.
Etter gjennomføring av bløtleggingsprosedyren fjernes trypsinet fra cellelysatet, og vevstykkene inkuberes videre ved 37 ° C i omtrent 20 - 30 minutter. Oppdelingen av cellene er forårsaket av gjentatt pipettering av vevsblandingen. Dette vil tillate cellene å skille seg fra membranen og komme til supernatanten. Når cellene er i supernatanten, inkuberes de og dyrkes ved ønsket temperatur og tidsperiode.
Den kalde trypsiniseringsmetoden har flere fordeler
- Høyere utbytte av levedyktige celler ettersom celleskaden minimeres. Celleskadene minimeres ved ikke å bruke sentrifugeringstrinn.
- Svært praktisk metode.
- Mindre arbeidskrevende.
Hovedbegrensningen med den kalde trypsiniseringsmetoden er at store mengder ikke kan brukes i ett tilfelle.
Hva er likhetene mellom varm og kald trypsinisering?
- Både varme og kalde trypsiniseringsprosesser bruker enzymet trypsin til oppdeling av celler.
- Både varme og kalde trypsiniseringsprosesser brukes i cellekulturprosedyrer for oppdeling av celler.
- I både varme og kalde trypsiniseringsbehandlingsprosedyrer er cellene avledet fra supernatanten.
Hva er forskjellen mellom varm og kald trypsinisering?
Diff Article Midt før tabell
Varm vs kald trypsinisering |
|
| Varm trypsinisering er metoden for å behandle cellene med trypsin under varme forhold ved en temperatur på 36,5 - 37 0. | Kald trypsinisering er prosessen med trypsinbehandling som foregår under kaldere forhold, fortrinnsvis i is som holder veldig lave temperaturer. |
| Protokoll | |
| De hakkede vevstykkene holdes kontinuerlig ved 37 ° C gjennom hele prosedyren. | De hakkede vevstykkene holdes opprinnelig ved iskalde temperaturer og holdes deretter på 37 0. |
| Temperatur | |
| Varm trypsinisering skjer ved 36,5 - 37 0 | Kald trypsinisering skjer ved iskalde temperaturer. |
| Forbruket tid | |
| Mindre tid som kreves for hele prosessen (rundt 4 timer) med varm trypsinisering. | Lengre tid kreves (rundt 6 - 24 timer) for kald trypsinisering. |
| Utbytte av levedyktige celler | |
| Lav trypsinisering. | Høy i kald trypsinisering. |
| Bruk av sentrifugering | |
| Sentrifugering er nødvendig for oppdeling av celler i varm trypsinisering. | Sentrifugering er ikke nødvendig ved kald trypsinisering. |
| Innledende vevmengde for trypsinisering | |
| En større mengde vev kan brukes i varm trypsinisering. | En mindre mengde vev kan brukes i kald trypsinisering. |
| Celleskader | |
| Høy på grunn av sentrifugering i varm trypsinisering. | Mindre på grunn av kald trypsinisering. |
Sammendrag - Varm vs kald trypsinisering
Trypsinisering er metoden for å bruke det proteinnedbrytende enzymet trypsin for oppdeling og fremstilling av primære cellekulturer under cellekulturprosessen. Det er to hovedteknikker for trypsinisering basert på temperaturene som ble brukt under prosedyren. De er varme og kalde trypsinisering. Varm trypsinisering utføres ved 37 ° C, mens kald trypsinisering utføres under iskalde forhold. Selv om kald trypsinisering tar lengre tid for fullføring, sies det å ha et høyere utbytte av levedyktige celler. Dette skyldes det faktum at celleskade minimeres i kald trypsinisering, da den ikke bruker kraftige sentrifugeringstrinn. Dette er forskjellen mellom varm og kald trypsinisering.
