Forskjellen Mellom Benzonase Og DNase

2024 Forfatter: Mildred Bawerman | [email protected]. Sist endret: 2023-12-16 08:41

Nøkkelforskjell - Benzonase vs DNase

Nedbrytning av nukleinsyrer er viktig for mange molekylærbiologiske teknikker. Det er mye brukt i rekombinant DNA-teknologi for å kvitte seg med uønskede fragmenter av DNA og RNA. Nukleinsyrenedbrytende enzymer er referert til som nukleaser, og de kan være av forskjellige typer basert på den nødvendige funksjonen. Nukleaser som nedbryter DNA er kjent som DNaser, mens de som nedbryter RNA er kjente RNaser. Disse enzymene brukes hovedsakelig i in vitro-eksperimenter der det utføres in vitro-molekylære tester for å isolere rent DNA, RNA eller proteiner. Benzonaser er en type nukleaser som nedbryter både DNA og RNA, mens DNaser bare nedbryter DNA. Dette er nøkkelforskjellen mellom Benzonase og DNase.

INNHOLD

1. Oversikt og

nøkkelforskjell 2. Hva er Benzonase

3. Hva er DNase

4. Likheter mellom Benzonase og DNase

5. Sammenligning side om side - Benzonase vs DNase i tabellform

6. Sammendrag

Hva er Benzonase?

Benzonase er en genetisk konstruert endonuklease fra Serratia marcescens. Dette enzymet produseres i E. coli-verter i industriell skala. Benzonase er i stand til å spalte dobbeltstrenget DNA, lineært DNA, sirkulært DNA og enkeltstrenget RNA. Dermed er Benzonase kommersielt viktig. Benzonase enzym er en protein dimer som har 245 identiske aminosyrer, ~ 30 kDa underenheter med to essensielle disulfidbindinger. Benzonase spalter nukleinsyrer i 5'-enden og resulterer i fragmenter med fri 5'-end. Benzonase kan spalte nukleinsyrer i hvilken som helst sekvens, men foretrekker GC-rike regioner.

Benzonase lagres ved -20 ^° C. Den optimale pH for enzymaktivitet er funnet å være 8,0 - 9,2. Anvendelsene av Benzonase inkluderer prøveforberedelse for protein 2D gelelektroforese der Benzonase fjerner bundne nukleinsyrer og fjerning av nukleinsyreforurensninger fra rekombinante proteinpreparater. Det brukes også til å redusere viskositeten til proteinekstrakter og forhindre sammenklumping av celler i en celleblanding.

Hva er DNase?

DNase er et nuklease, hydrolytisk enzym som bare er i stand til å spalte dobbeltstrenget DNA. Det er to hovedtyper av DNaser: DNase I og DNase II. DNase I deltar i spaltning av dobbeltstrenget DNA for å produsere polynukleotider med 5'-frie ender. DNase II er involvert i spaltning av dobbeltstrenget DNA for å produsere polynukleotidstrenger med 3'-frie ender eller overheng.

DNase I

DNase I fungerer ved en optimal pH mellom 7,0 - 8,0. Enzymaktiviteten avhenger av mange ioniske medfaktorer som inkluderer Ca2 ⁺, Mg2 ⁺ eller Mn2 ⁺. Aktiviteten til Mg ²⁺ og Mn ²⁺ bestemmer funksjonen til DNase I. I nærvær av Mg ²⁺ spalter DNase I hver streng av dsDNA uavhengig. Dette skjer på en tilfeldig måte. I kontrast, i nærvær av Mn ^2+, spalter enzymet begge DNA-strengene på omtrent samme sted. Denne spaltningen vil resultere i å produsere to typer DNA-fragmenter; en type med stumpe ender og en annen type med ett eller to nukleotidoverheng.

Figur 02: DNase

DNase II

DNase II-funksjoner ved en optimal pH på 4,5-5,0, og toverdige metallioner kreves for dets aktivitet, i likhet med DNase I. Mekanismen til DNase II er kjent for å bestå av tre hovedtrinn.

Flere enkeltstrengsbrudd induseres i DNA-ryggraden.
Syreoppløselige nukleotider og oligonukleotider produseres.
Ikke-lineær hyperkromisk skift forekommer i siste fase.

De viktigste hemmere av DNase-enzym inkluderer metallchelatorer, overgangsmetaller og kjemikalier som natriumdodecylsulfat og β - merkaptoetanol.

De viktigste anvendelsene av DNase inkluderer utarbeidelse av DNA-frie RNA-ekstrakter og proteinekstrakter, og fjerning av mal-DNA under in vitro transkripsjonseksperimenter.

Hva er likhetene mellom Benzonase og DNase?

Begge er hydrolytiske enzymer.
Begge er nukleaser.
Begge deltar ved å spalte fosfodiesterbindinger av nukleinsyrer.
Begge krever en optimal pH og lagringstemperatur for å opprettholde aktiviteten til enzymet.
Hemmere av enzymer inkluderer chelateringsmidler, overgangsmetaller og vaskemiddelkjemikalier.
Applikasjoner er hovedsakelig fokusert på å skaffe ekstrakt av høy renhet av DNA, RNA og proteiner.
Begge enzymene kan produseres via genteknikk.

Hva er forskjellen mellom Benzonase og DNase?

Diff Article Midt før tabell

Benzonase vs DNase
Benzonase er et enzym som er i stand til å spalte dobbeltstrenget DNA, lineært DNA, sirkulært DNA og RNA.	DNase er et enzym som er i stand til å spalte dobbeltstrenget DNA.
Underlag for enzymet
Både DNA og RNA er substrater for benzonase.	DNA er substratet for DNase.
Struktur
Optimalt pH-område for Benzonase er 7,0 -8,0	Optimale pH-områder for DNase I er 7,0 - 8,0 og DNase II er 4,5 - 5,0.

Sammendrag - Benzonase vs DNase

Nukleaseenzymer er mye brukt i forskjellige eksperimentelle prosedyrer med hensyn til molekylærbiologi og genteknologi. Benzonase og DNase er to typer nukleaser. Benzonase er involvert i nedbrytning av både DNA og RNA, mens DNase er involvert i spaltning av dobbeltstrenget DNA. Dette er den grunnleggende forskjellen mellom benzonase og DNase. For tiden produseres begge disse nukleasetypene gjennom rekombinant DNA-teknologi som gir enzymer av høyere kvalitet som er optimalisert for maksimal produksjon.

Last ned PDF-versjon av Benzonase vs DNase

Du kan laste ned PDF-versjonen av denne artikkelen og bruke den til frakoblede formål som angitt i en henvisning. Last ned PDF-versjon her Forskjellen mellom Benzonase og DNase