Hovedforskjell - Gelelektroforese vs SDS-side
Gelelektroforese er en teknikk som skiller makromolekyler i et elektrisk felt. Det er en vanlig metode i molekylærbiologi å skille DNA, RNA og proteiner fra blandinger i henhold til deres molekylære størrelser. SDS Page er en type gelelektroforese som brukes til å skille proteiner fra en proteinblanding basert på størrelsen. Gelelektroforese er et begrep som brukes til å referere til den normale teknikken som brukes for DNA-, RNA- og proteinseparasjon, mens SDS Page er en type gelelektroforese. Dette er nøkkelforskjellen mellom gelelektroforese og SDS-side.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er gelelektroforese
3. Hva er SDS Side
4. Sammenligning side om side - Gelelektroforese vs SDS Side
5. Sammendrag
Hva er gelelektroforese?
Gelelektroforese er en vanlig teknikk som brukes i laboratorier for å skille ladede molekyler som DNA, RNA, proteiner, etc. fra deres blandinger. En gel brukes i gelelektroforese. Det fungerer som en molekylsikt. Det er to typer geler som brukes i gelelektroforese, nemlig agarose og polyakrylamid. Valg av en gel- og gelpreparat er viktige faktorer som skal vurderes i gelelektroforese, siden porestørrelsen på gelen bør manipuleres nøye for en god separasjon av molekyler gjennom gelelektroforese. Gelelektroforese har et elektrisk felt koblet til to ender av gelen. Den ene enden av gelen viser en positiv ladning mens den andre enden er negativt ladet.
DNA og RNA er negativt ladede molekyler. Når de er lastet inn i gelen fra den negative enden av gelen og påført det elektriske feltet, vandrer de gjennom gelporene mot den positivt ladede enden av gelen. Hastigheten på migrasjonen avhenger av ladningen og størrelsen på molekylet. Mindre molekyler vandrer lett gjennom gelporene enn større molekyler. Derfor reiser mindre molekyler en lang avstand gjennom gelen, og de større molekylene reiser en kort avstand. For å observere vandring av molekyler på gelen, brukes spesielle fargestoffer. Det elektriske feltet påføres i en viss tidsperiode og stoppes for å forhindre tap av molekyler og for å holde molekylene i sine bevegelige posisjoner. Ulike bånd kan observeres i gelen. Disse båndene representerer molekylene i forskjellige størrelser. Derfor,gelelektroforese er nyttig for å skille molekyler i henhold til deres størrelse.
Gelelektroforese er innlemmet i forskjellige teknikker som en preparativ teknikk i molekylærbiologi som PCR, RFLP, kloning, DNA-sekvensering, Southern blotting, genomkartlegging, etc.
Figur 01: Agarosegelelektroforese
Hva er SDS-siden?
Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS Page) er en type gelelektroforese som brukes til å skille proteiner. Når gelelektroforese brukes til å skille proteiner, er det behov for spesielle behandlinger siden proteiner ikke er negativt ladet som DNA og RNA og ikke migrerer mot den positive enden eller den negative enden. Derfor blir proteiner denaturert og belagt med en negativ ladning før gelelektroforese. Det gjøres ved hjelp av et vaskemiddel kalt natriumdodecylsulfat (SDS). Gelelektroforesen som bruker SDS og en polyakrylamidgel for bæremediet er kjent som SDS Page. Denne teknikken brukes ofte innen biokjemi, genetikk, rettsmedisin og molekylærbiologi.
I løpet av SDS-siden blandes proteiner med SDS. SDS bretter proteiner ut i en lineær form og belegger dem med en negativ ladning proporsjonal med deres molekylære masse. På grunn av den negative ladningen migrerer proteinmolekyler mot den positive ladningsenden av gelen og separeres i henhold til deres molekylære masse. På SDS-siden brukes polyakrylamid som den faste bæreren for gelen. Den faktiske separasjonen av proteinene avhenger hovedsakelig av gelens egenskaper. Derfor bør preparering av polyakrylamidgel gjøres nøye, og riktige konsentrasjoner av polyakrylamid bør brukes. Polyakrylamidgeler har høy oppløsning enn agarosegeler. Derfor anses SDS Page som en høyoppløselig teknikk for proteinseparasjon.
SDS Page er en type denaturerende gelelektroforese. Det har en stor begrensning i proteinanalyse. Siden SDS denaturerer proteiner før separasjon, tillater det ikke påvisning av enzymatisk aktivitet, proteinbindende interaksjoner, proteinkofaktorer osv.
Figur 02: SDS side
Hva er forskjellen mellom gelelektroforese og SDS Page?
Gelelektroforese vs SDS-side |
|
| Gelelektroforese er en metode som utføres for å skille makromolekyler ved hjelp av et elektrisk felt. | SDS Page er en høyoppløselig gelelektroforeseteknikk som brukes til å skille proteiner basert på massen. |
| Gel Run | |
| Det kan utføres på en horisontal eller vertikal måte. | SDS-siden kjører alltid vertikalt. |
| Grunnlag for separasjon | |
| Separasjon skjer i henhold til ladning og størrelse. | Proteinseparasjon skjer i henhold til masse og ladning. |
| Vedtak | |
| Agarosegelelektroforese har lav oppløsning og polyakrylamidgelelektroforese har høyere oppløsning | SDS Page har en bedre oppløsning. |
| Denaturering | |
| Gelelektroforese inkluderer både denaturerende og ikke-denaturerende teknikker. | SDS Page denaturerer proteiner før separasjon. |
Sammendrag - Gelelektroforese vs SDS-side
Gelelektroforese er en vanlig teknikk som brukes til separasjon og analyse av DNA, RNA og proteiner basert på størrelse og ladning. Det er to hovedtyper av gelelektroforese, nemlig agarosegelelektroforese og polyakrylamidgelelektroforese. Agarosegeler brukes hovedsakelig til nukleinsyreseparasjon; når høyere oppløsning er nødvendig, brukes polyakrylamidgeler. SDS Page er en type gelelektroforese som ofte brukes til å skille komplekse blandinger av proteiner. Det betraktes som en høyoppløselig proteinseparasjonsteknikk. Dette er forskjellen mellom gelelektroforese og SDS Page.
