Innholdsfortegnelse:
- Nøkkelforskjell - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
- Hva er Maxam Gilbert Sequencing?
- Hva er Sanger Sequencing?
- Hva er forskjellen mellom Maxam Gilbert og Sanger Sequencing?
- Sammendrag - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Video: Forskjellen Mellom Maxam Gilbert Og Sanger Sequencing
2024 Forfatter: Mildred Bawerman | [email protected]. Sist endret: 2023-12-16 08:41
Nøkkelforskjell - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Nukleotider er de grunnleggende strukturelle enhetene og byggesteinene i DNA. DNA-molekylet er sammensatt av en polynukleotidkjede. Det er fire forskjellige nukleotider som finnes i DNA. Disse nukleotidene er sammensatt av fire forskjellige nitrogenholdige baser kalt A (adenin), G (guanin), C (cytosin), T (tymin). Rekkefølgen av nukleotidene i DNA-molekylet har stor betydning, da den koder for viktig genetisk informasjon for vekst og utvikling av organismer. DNA-sekvensering refererer til prosessen som bestemmer den nøyaktige nukleotidsekvensen til DNA. Det er forskjellige DNA-sekvenseringsmetoder. Maxam Gilbert-sekvensering og Sanger DNA-sekvensering er to metoder for DNA-sekvensering som tilhører første generasjons sekvensering. Maxam Gilbert-sekvenseringsprosedyre bestemmer basesekvensen ved å kjemisk spalte 5'-endemerkede DNA-fragmenter fortrinnsvis ved hver av fire nukleotider og gelelektroforese. Sanger-sekvenseringsprosedyre bestemmer nukleotidsekvensen ved å syntetisere enkeltstrenget DNA ved hjelp av DNA-polymerase og dideoxynukleotider og gelelektroforese. Dette er nøkkelforskjellen mellom Maxam Gilbert og Sanger Sequencing.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er Maxam Gilbert
3. Hva er Sanger-sekvensering
4. Sammenligning ved siden av hverandre - Maxam Gilbert vs Sanger-sekvensering
5. Sammendrag
Hva er Maxam Gilbert Sequencing?
Maxam Gilbert-sekvensering, også kjent som kjemisk sekvenseringsmetode, er en teknikk som ble utviklet for å bestemme rekkefølgen av nukleotidene i DNA. Denne metoden ble introdusert av Walter Gilbert og Alan Maxam i 1976 og ble populær siden den kan utføres direkte med renset DNA. Maxam Gilbert-metoden tilhører den første generasjonen av DNA-sekvensering, og det var den første sekvenseringsmetoden som ble brukt mye av forskere.
Det grunnleggende prinsippet for denne metoden ligger i begrensningen av de endemerkede DNA-fragmentene ved spesifikke baser av basespesifikke kjemikalier og betingelser og separasjon av de merkede fragmentene ved elektroforese som vist i figur 01. Fragmenter er skilt i henhold til deres størrelse på gel. Siden fragmentene er merket, kan sekvensen til DNA-molekylet lett utledes.
Maxam gilbert-metoden bruker basisspesifikke kjemikalier for å bryte DNA på bestemte baser. To vanlige kjemikalier kalt dimetylsulfat og hydrazin kjemikalier brukes til å angripe henholdsvis puriner og pyrimidiner.
Maxam Gilbert sekvenseringsmetode utføres via flere trinn som følger.
- Rensing av DNA-sekvensen ved bruk av restriksjonsendonukleaser
- Merking av endene av DNA-fragmentene ved tilsetning av radioaktive fosfater
- Rensing av de merkede fragmentene fra ikke-merkede fragmenter ved gelelektroforese
- Separasjon av det endemerkede DNA i fire rør og behandling med basespesifikke kjemikalier separat
- Elektroforese av innholdet i hvert rør på separate linjer på en gel og fragment separasjon i henhold til deres lengde.
- Påvisning av fragmentene ved hjelp av autoradiograph.
Figur 01: Maxam Gilbert sekvensering
Hva er Sanger Sequencing?
Sanger Sequencing er en sekvenseringsmetode utviklet av Frederick Sanger og hans kolleger i 1977 for å bestemme basesekvensen til et gitt DNA-fragment. Det er også kjent som kjedetermineringssekvensering eller Dideoxy-sekvenseringsmetode. Denne metoden fungerer på prinsippet om selektiv inkorporering av kjedeavslutende dideoxynukleotider (ddNTPs) som ddGTP, ddCTP, ddATP og ddTTP av DNA-polymerase under syntesen av enkeltstrenget DNA for å avslutte dannelse av streng. Dideoxynukleotider mangler 3'OH-grupper for dannelse av fosfodiesterbindinger med tilstøtende nukleotid. Derfor stopper strengformasjonen når en ddNTP er innlemmet i nydannende streng under sanger-sekvensering.
I denne metoden utføres fire separate DNA-syntesereaksjoner (PCR) i fire separate rør med en type ddNTP. Andre krav er også gitt for rør for PCR inkludert primere, dNTP, Taq-polymerase, spesifikke forhold, etc. Fire separate reaksjoner utføres i fire rør med fire blandinger. Etter PCR-reaksjoner blir resulterende DNA-fragmenter denaturert og separert ved gelelektroforese. Deretter visualiseres fragmentene ved å bruke enten en merket (radioaktiv eller fluorescerende) primer eller dNTP som vist i figur 02.
Figur 02: Sanger-sekvensering
Hva er forskjellen mellom Maxam Gilbert og Sanger Sequencing?
Diff Article Middle before Table
Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing |
|
Maxam Gilbert-sekvensering er den første teknikken som er utviklet for DNA-sekvensering. | Sanger-sekvenseringsmetoden ble introdusert etter Maxam Gilbert-sekvenseringsmetoden. |
Bruk | |
Denne metoden brukes sjelden. | Sanger-sekvensering brukes rutinemessig til sekvensering. |
Bruk av farlige kjemikalier | |
Den bruker farlige kjemikalier. | Bruk av farlige kjemikalier er begrenset sammenlignet med Maxam Gilbert-metoden. |
Merking for påvisning | |
Denne metoden bruker radioaktivt P 32 for merking av endene av DNA-fragmentene. | Sanger-sekvensering bruker radioaktivt eller fluorescerende merkede ddNTPer. |
Sammendrag - Maxam Gilbert vs Sanger Sequencing
Maxam Gilbert og Sanger-sekvensering er to typer DNA-sekvenseringsteknikker som kommer inn under første generasjons DNA-sekvensering. Maxam Gilbert-sekvensering er den første metoden som ble introdusert for DNA-sekvensering i 1976, og den utføres ved å bryte de endemerkede DNA-fragmentene av basespesifikke kjemikalier. Derfor er det kjent som kjemisk sekvensering. Sanger-sekvenseringsmetoden ble introdusert i 1977, og er basert på ddNTP-drevne kjedeavslutningsreaksjoner. Sanger-sekvenseringsmetode populær enn Maxam Gilbert-metoden på grunn av flere ulemper ved Maxam Gilbert-metoden, som for mye tidsforbruk, bruk av farlige kjemikalier, etc. Dette er forskjellen mellom Maxam Gilbert og Sanger-sekvensering.
Anbefalt:
Forskjellen Mellom Shotgun Sequencing Og Next Generation Sequencing
Hovedforskjellen mellom hagle-sekvensering og neste generasjons sekvensering er at hagle-sekvensering er en sekvenseringsmetode som tilfeldig bryter opp DNA
Forskjellen Mellom Sanger Sequencing Og Pyrosequencing
Nøkkelforskjell - Sanger Sequencing vs Pyrosequencing DNA sequencing er veldig viktig for DNA-analyse siden kunnskap om de riktige nukleotidene ordner
Forskjellen Mellom NGS Og Sanger Sequencing
Nøkkelforskjell - NGS vs Sanger Sequencing Next Generation Sequencing (NGS) og Sanger Sequencing er to typer nukleotidsekvenseringsteknikker som utvikler
Forskjellen Mellom Nøkkelforskjellen Mellom Metalliske Og Ikke-metalliske Mineraler
Hovedforskjell - Metallisk vs Ikke-metalliske mineraler Et mineral er en naturlig forekommende fast og uorganisk bestanddel med en bestemt kjemisk formel
Forskjellen Mellom Gammel Engelsk Og Mellom Engelsk Og Moderne Engelsk
Old English vs Middle English vs Modern English Old English, Middle English og Modern English er klassifiseringen av engelsk språk, og de