Nøkkelforskjell - Phusion vs Taq Polymerase
DNA-polymeraser er mye brukte enzymer i molekylærbiologiske teknikker og er også naturlig til stede i alle organismer som gjennomgår DNA-replikasjon. De er de viktigste polymeriserende enzymer som involverer under replikasjon. DNA-polymerase er i stand til å tilsette nukleotider til den frie 3'-enden av DNA-strengen og forårsaker utvidelse av en ny streng. For øyeblikket, på grunn av utviklingen av molekylærbiologi innen sykdomsdiagnostikk og industrielle anvendelser, er det viktig å fremstille polymeraser med forskjellige fordelaktige egenskaper. Dette øker nøyaktigheten av metoden og gjør den til en raskere teknikk. Phusion og Taq polymerase er to kommersielt produserte termostabile polymeraseenzymer som brukes i spesielle molekylære applikasjoner. Fusion er en DNA-polymerase isolert fra Pyrococcus furiosus og brukes hovedsakelig i kloningseksperimenter for å øke troskapen. Taq DNA Polymerase er standard DNA-polymerase som brukes i Polymerase Chain Reaction (PCR), og den er isolert fra den termostabile bakterien. Thermus aquaticus. Hovedforskjellen mellom de to enzymene er kildemikroorganismen. Fusjon er isolert fra ekstremofilen, Pyrococcus furiosus, mens Taq-polymerase er isolert fra termofilen, Thermus aquaticus. Taq-polymerase er isolert fra termofilen, Thermus aquaticus. Taq-polymerase er isolert fra termofilen, Thermus aquaticus.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er Phusion
3. Hva er Taq Polymerase
4. Likheter mellom Phusion og Taq Polymerase
5. Sammenligning side om side - Phusion vs Taq Polymerase i tabellform
6. Sammendrag
Hva er Phusion?
Phusion DNA-polymerase er en ny polymerase som er produsert ved å isolere enzymet fra Pyrococcus furiosus, som er en ekstremofil Archaea. Disse mikrober ligger under ekstremt høye temperaturforhold, og gjør derved polymerasen til en svært varmestabil polymerase. Fusjonspolymerase brukes for å oppnå ekstrem troskap over konvensjonell termostabil polymerase; Taq polymerase. Fusjonspolymerase er i stand til å forsterke lange maler opp til 7,5 kb genomisk DNA. Den optimale polymerisasjonskapasiteten til Phusion polymerase er ved 72 ° C. Fusion brukes også i kloning av produkter for sekvensering, ekspresjonsanalyse og mutasjonsanalyse.
Phusion DNA-polymerase har 3 '- 5' exonukleaseaktivitet. Dette tillater korrekturlesing av den nylig syntetiserte strengen etter syntesen. Derfor blir nukleotidmatchene lett reparert. Dermed har den en mindre feilrate. Generelle fordeler med Phusion polymerase er;
- Extreme Fidelity
- Høy hastighet og redusert forlengelsestid
- Robuste reaksjoner og krever minimal optimalisering
- Høy avkastning
Figur 01: Phusion
Den største ulempen med Phusion-polymerase er at den inhiberes i nærvær av deoksyuridintrifosfat (dUTP). Når dUTPs akkumuleres i reaksjonsblandingen, kan det hemme virkningen av Phusion polymerase. Dette forhindres ved å behandle reaksjonsblandingen med dUTPase før tilsetning av enzymet. For tiden brukes en dUTP-resistent variant av Phusion-polymerase kjent som Pfu Turbo i stedet for Phusion-polymerase som et middel mot dette problemet.
Hva er Taq Polymerase?
Oppfinnelsen av Taq DNA-polymerase har revolusjonert feltet molekylærbiologi. Det løste et stort problem i DNA-amplifikasjon. Taq DNA polymerase er et varmestabilt polymeraseenzym ekstrahert og isolert fra den termofile bakterien, Thermus aquaticus. Oppdagelsen av disse enzymene fører til utvikling av PCR. Dette enzymet har tillatt bruk av polymerasekjedereaksjon i DNA-amplifikasjon i stedet for konvensjonelle arbeidskrevende kloningsteknikker. PCR brukes nå i molekylær diagnostikk, landbruks- og industrifelt med mange nye varianter lagt til teknikken.
Figur 02: Taq Polymerase
Taq DNA-polymerase fungerer ved det optimale temperaturområdet mellom 72 0 C - 80 0 C. Taq DNA-polymerase krever en ko-faktor; magnesium for sin funksjon. Taq-polymerase har ikke 3 '- 5' korrekturlesingsevne, derfor er feilraten for Taq DNA-polymerase høy i forhold til flere nyere typer DNA-polymeraser som Phusion-polymerase etc. Men populariteten til Taq DNA-polymerase er fortsatt den det samme over hele vitenskapens verden på grunn av enzymets bekvemmelighet og fleksibilitet.
Hva er likhetene mellom Phusion og Taq-polymerase?
- Både Phusion- og Taq-polymeraseenzymer er polymeriserende enzymer som er i stand til å tilsette nukleotider til den 3'-frie enden av DNA-strengen.
- Både Phusion- og Taq-polymeraser krever en primersekvens for å initiere polymerisering.
- Både Phusion- og Taq-polymeraser er varmestabile.
- Både Phusion- og Taq-polymeraser brukes i PCR-mekanismer for å amplifisere DNA.
- Når polymerase tilsettes til reaksjonsblandingen, tilsettes både Phusion og Taq polymeraser sist for å sikre effektiviteten av enzymet.
- Både Phusion- og Taq-polymeraser syntetiseres kommersielt for eksperimentelle formål med molekylærbiologi.
- Både Phusion og Taq polymeraser krever en kofaktor for å fullføre funksjonen.
Hva er forskjellen mellom Phusion og Taq Polymerase?
Diff Article Midt før tabell
Phusion vs Taq Polymerase |
|
| Fusjon er en DNA-polymerase isolert fra Pyrococcus furiosus og brukes hovedsakelig i kloningseksperimenter for å øke troskapen. | Taq DNA Polymerase er standard DNA-polymerase som brukes i Polymerase Chain Reaction (PCR), og den er isolert fra den termostabile bakterien, Thermus aquaticus. |
| Kildeorganisme | |
| Fusjon ekstraheres fra ekstremofil archaea - Pyrococcus furiosus. | Disse litterære verkene strekker seg fra koloniseringsperioden til avkoloniseringsperioden. |
| Evne til å lese korrektur | |
| 3 '- 5' korrekt leseferdighet er til stede i Phusion. | 3 '- 5' bevisavlesningsevne er fraværende i Taq-polymerase. |
| gjengivelse | |
| High fidelity er der med Phusion. | Taq-polymerase viser lav trofasthet. |
| Forsterkning | |
| Fusjon er i stand til å forsterke lange DNA-fragmenter. | Taq-polymerase er i stand til å amplifisere mye kortere DNA-fragmenter. |
| dUTP Forgiftning | |
| Fusjonsvirkning er hemmet av oddet akkumulering. | Taq-polymerase hemmes ikke av dUPT. |
Sammendrag - Phusion vs Taq polymerase
Phusion og Taq DNA-polymerase er to varmestabile polymeraser som brukes i PCR-teknikker. Fusjon er en polymerase isolert fra ekstremofilen, Pyrococcus furiosus, mens Taq er isolert fra de termostabile bakteriene Thermus aquaticus. Taq DNA-polymerase-oppdagelse fører til PCR-oppfinnelsen. Phusion har mange fordeler i forhold til Taq, noe som har gjort Phusion til et bedre alternativ når det gjelder å produsere high fidelity DNA. Imidlertid blir Taq-polymerase fortsatt brukt som standardpolymeraseenzym i PCR. Dette er forskjellen mellom Phusion og Taq polymerase.
