Nøkkelforskjell - DNA vs RNA-ekstraksjon
Studiet av DNA og RNA er viktige aspekter for å forstå de grunnleggende begrepene molekylærbiologi, bioteknologi og genetikk. Ekstraksjon av rent DNA og RNA-prøver er nødvendig for å utføre eksperimentelle prosedyrer under disse studiene. Hovedforskjellen mellom DNA- og RNA-ekstraksjon er at DNA-ekstraksjonsprosessen renser DNA mens RNA-ekstraksjon renser RNA. DNA-ekstraksjonsprosessen har tre forskjellige trinn: cellelyse og katabolisme av membranlipider og proteiner, klumping av katabolitter ved konsentrert saltoppløsning og utfelling av DNA med etanol. Trestegsprosedyren kan bestå av to valgfrie trinn. RNA-rensingsprosess består av fire forskjellige trinn: tilsetning av guanidiumtiocyanat for cellelyse, proteindenaturering inkludert ribonukleaser,separasjon av RNA ved tilsetning av kloroform og fenol og vasking av bunnfallet ved bruk av etanol.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er DNA-ekstraksjon
3. Hva er RNA-ekstraksjon
4. Likheter mellom DNA og RNA-ekstraksjon
5. Sammenligning side om side - DNA vs RNA-ekstraksjon i tabellform
6. Sammendrag
Hva er DNA-ekstraksjon?
DNA-ekstraksjon er en fysisk og kjemisk prosess som brukes til å rense DNA fra en prøve. DNA-ekstraksjon er et viktig aspekt i sammenheng med molekylærbiologi og rettsvitenskap. Prosessen består av tre grunnleggende trinn. I utgangspunktet bør cellene av interesse oppnås. Deretter blir cellelyse lagt til rette for å bryte cellemembranen, som åpner cellen og eksponerer cytoplasma sammen med DNA. Surfaktanter eller andre vaskemidler kan brukes til å lyse lipidene fra cellemembranen mens proteiner som er tilstede kataboliseres av proteaser. Dette er et valgfritt trinn. Når cellen er lysert, blir klumping av de kataboliserte molekylene tilrettelagt av konsentrerte saltløsninger. Det blir fulgt av sentrifugering av løsningen som skiller ruskeklumpene fra DNA. I denne fasen,det differensierte DNA blandes med reagensene og saltene som brukes under cellesyklusen.
Figur 01: DNA-ekstraksjon
For å rense det ytterligere, kan følgende trinn brukes. En metode er etanolutfelling, som innebærer blanding av iskald etanol med den separerte DNA-prøven. DNA er uoppløselig i alkohol og produserer derved en pellet på grunn av aggregering av DNA-molekyler sammen. Natriumacetat tilsettes i denne prosessen for å øke graden av utfelling ved å øke ionestyrken. I tillegg til etanolutfellingsprosessen kan fenol-kloroformekstraksjonsprosess også induseres for dette. I denne metoden denaturerer fenol proteinene som er tilstede i prøven. Når sentrifugert, vil denaturerte proteiner forbli i den organiske fasen, mens DNA-molekylene som er blandet med kloroform vil være til stede i den vandige fasen. Kloroform vil fjerne fenolrester. Når ekstraksjonen er fullført,DNA holdes oppløst i TE-buffer eller ultrarent vann.
Hva er RNA-ekstraksjon?
RNA-rensing er en prosess der RNA blir renset fra en biologisk prøve. På grunn av tilstedeværelsen av ribonuklease i celler og vev, er denne prosessen komplisert. Ribonukleaseenzym har evnen til å bryte ned RNA raskt. Den kjemiske naturen til ribonukleaser er ekstremt stabil, og det er vanskelig å inaktivere dem. Å nøytralisere ribonukleasene er et alternativ. Siden dette enzymet er allestedsnærværende i celler og vev, utvikles spesielle teknikker for RNA-ekstraksjon. Av de mange metodene er den vanlige metoden ekstraksjon av guanidiniumtiocynat-fenol-kloroform.
Figur 02: RNA-ekstraksjon
Guanidiniumtiocynat-fenol-kloroform-ekstraksjonsmetoden avhenger av sentrifugering og faseseparasjon. Blandingen som skal sentrifugeres består av den vandige prøven og en vannmettet løsning som består av fenol og kloroform. Når den er sentrifugert, består løsningen av en øvre vandig fase og en lavere organisk fase under nøytrale pH-betingelser (pH 7-8). RNA er tilstede i den vandige fasen. Den organiske fasen består vanligvis av proteiner oppløst i fenol og lipider oppløst i kloroform. Et kaotropisk middel (et molekyl som har evnen til å bryte hydrogenbindinger mellom vannmolekyler) tilsettes; dette er kjent som guanidiniumtiocyanat. Dette middel har evnen til å denaturere proteiner som inkluderer ribonukleaser som kan nedbryte RNA og er involvert i cellelyse. Det skiller også rRNA fra ribosomale proteiner. Det siste trinnet med RNA-rensing er å vaske utfellingen av den vandige fasen med etanol. RNA kan også renses ved bruk av flytende nitrogen.
Hva er likhetene mellom DNA og RNA-ekstraksjon?
- Begge ekstraksjonsprosesser bruker skadelige kjemikalier som fenol og kloroform.
- Sentrifugering er en viktig teknikk for begge prosessene.
- Etanol brukes til å vaske bunnfallet og for å oppnå renset DNA eller RNA.
Hva er forskjellen mellom DNA og RNA-ekstraksjon?
Diff Article Midt før tabell
DNA vs RNA-ekstraksjon |
|
| DNA-ekstraksjon er en prosess som trekker ut DNA fra en organisme eller prøve. | RNA-ekstraksjon er en prosess som trekker ut RNA fra en prøve. |
| Fremgangsmåte | |
| DNA-ekstraksjonsprosessen består av tre forskjellige trinn med to valgfrie trinn. | RNA-ekstraksjonsprosessen består av fire forskjellige trinn. |
| Reagenser | |
| Surfaktanter, proteaser (valgfritt), alkohol, kloroform, fenol, natriumacetat brukes til DNA-ekstraksjon. | Guanidiumtiocyanat, kloroform, fenol, etanol brukes til RNA-ekstraksjon. |
Sammendrag - DNA vs RNA-ekstraksjon
DNA- og RNA-ekstraksjon er viktige aspekter av eksperimentelle prosedyrer for studiet av molekylærbiologi, genetikk og bioteknologi. Begge prosessene involverer lignende reagenser, men RNA-ekstraksjon benytter et spesielt reagens kjent som Guanidium tiocyanat som reduserer aktiviteten til ribonukleaser. Dette er hovedforskjellen mellom DNA- og RNA-ekstraksjon.
Last ned PDF-versjon av DNA vs RNA-ekstraksjon
Du kan laste ned PDF-versjonen av denne artikkelen og bruke den til frakoblede formål som angitt i en henvisning. Vennligst last ned PDF-versjon her Forskjellen mellom DNA og RNA-ekstraksjon
