Nøkkelforskjell - YAC vs M13 Phage Vector
DNA-kloning er en viktig prosess som muliggjør forplantning av viktige DNA-fragmenter av organismer. Det krever sammenføyning av spesifikt DNA med vektor-DNA for å skape rekombinant DNA som transformeres til vertsorganismen. En vektor er et DNA-molekyl som oppfører seg som et middel til å føre fremmed genetisk materiale inn i en annen celle eller organisme. Den skal kunne replikere inne i vertsorganismen og produsere flere kopier av rekombinant DNA. Det er forskjellige typer vektorer som brukes i DNA-kloning. Gjær kunstig kromosom (YAC) og M13 fagvektor er to typer blant dem. Hovedforskjellen mellom YAC og M13 fagvektor er at YAC er et kunstig kromosom som replikerer i gjærceller mens M13 fagvektor er et enkeltstrenget sirkulært DNA av bakteriofag M13 som replikerer i E Coli-celler.
INNHOLD
1. Oversikt og
nøkkelforskjell 2. Hva er YAC
3. Hva er M13 fagvektor
4. Sammenligning side om side - YAC mot M13 fagvektor
5. Sammendrag
Hva er en YAC Vector?
YAC er et kunstig bygd kromosom som har evnen til å bære et stort segment av fremmed DNA og replikere i gjærcellene. Den har sentromere, telomere og autonome replikerende sekvenser som er essensielle for replikasjon og stabilitet. YAC bør også bære en selektiv markør eller markører og begrensningssteder for å gjøre det til en effektiv kloningsvektor. Store sekvenser fra 1000 kb til 2000 kb kan settes inn i YAC og overføres til gjær.
Figur 01: YAC-vektor
Hva er M13 Phage Vector?
Bacteriophage M13 er et virus som infiserer og replikerer i E Coli. Genomet til M13-bakteriofagen er liten i størrelse, omtrent 6,7 kb. Det er et enkeltstrenget, sirkulært og positivt sanse-DNA. Dette viruset infiserer spesifikt E Coli-bakterier gjennom F pilus. Når den kommer inn i ssDNA i bakterien, syntetiserer den sin komplementære streng og blir dsDNA eller den replikative formen (RF) av M13. RF kan oppføre seg som et plasmid i vertsorganismen. DsDNA replikerer i E Coli og produserer ssDNA med nye fager. Disse nye fagene frigjøres kontinuerlig fra E Coli uten å drepe vertscellen. Imidlertid reduserer infeksjonen veksten av E Coli. dsDNA kan ekstraheres fra bakterieceller og brukes som vektorer i DNA-kloning. De er kjent som M13 fagvektorer. De kan enkelt manipuleres og brukes på samme måte som plasmidvektorer.
Den iboende evnen til infeksjon av disse M13-fagene tjener som en god kvalifikasjon for å bli brukt som en vektor i genkloning. Når M13 utvikles til en vektor, bør flere elementer inkorporeres i genomet. De er et gen for lac repressor (lac I) protein, den operatør-proksimale regionen til lac Z-genet, en lac-promotor og et multippel kloningssted (polylinker). Når dsDNA av M13 brukes som vektorer, kan den behandles som en plasmidvektor. Imidlertid har bruken av ssDNA M13 fordeler i DNA-sekvensering og stedrettet mutagenese.
Siden M13-fagvektoren bærer flere kloningssteder i lacZ-regionen, kan rekombinerte vektorer lett identifiseres ved den blå / hvite koloniscreeningen på agarplater som inneholder IPTG og X-Gal. Blå plaketter produsert på platene inneholder ikke de rekombinerte fager. Derfor kan fager med innsatser velges for kloningsformålet.
Figur 02: Bakteriofag M13
Hva er forskjellen mellom YAC og M13 Phage Vector?
Diff Article Middle before Table
YAC vs M13 Phage Vector |
|
| YAC er et genetisk konstruert kromosom som har evnen til å bære et stort segment av fremmed DNA og replikere i gjærcellene. | M13 fagvektor er en virusvektor utviklet av bakteriofag M13 som brukes til å sette inn fremmed DNA i E Coli. |
| Hensikt | |
| YAC-er ble designet for å klone store fragmenter av genomisk DNA i gjær. | M13 fagvektorer brukes til å sette inn fremmed DNA i E Coli. |
| Sett inn lengde | |
| YAC-er kan inneholde megabase-størrelse genomiske innsatser (1000 kb - 2000 kb). | Størrelsen på innsatsene er omtrent 1500 bps. |
| Konstruksjon | |
| YAC DNA er vanskelig å rense intakt og krever høy konsentrasjon for å generere YAC vektorsystem. | Det skjer via syklisk fotosyntetisk elektronkjede. |
| Stabilitet | |
| YAC er ustabil. | M13-fager kan enkelt ekstraheres. |
| Størrelse | |
| Enzymer er større molekyler. | M13-fager er stabile enn YAC. |
Sammendrag - YAC vs M13 Phage Vector
YAC er et kunstig konstruert vektorsystem som bruker en spesifikk region av gjærkromosom for å sette inn store segmenter av genetisk materiale i gjærceller. M13 fagvektor er et vektorsystem avledet fra bakteriofag M 13 som bruker E coli som vertsorganisme. Dette er hovedforskjellen mellom YAC og M13 Phage Vector. Begge er like nyttige i rekombinant DNA-teknologi og genkloning.
