Forskjellen Mellom Kloning Og Subkloning

2024 Forfatter: Mildred Bawerman | [email protected]. Sist endret: 2023-12-16 08:41

Nøkkelforskjell - kloning vs subkloning

Kloning og subkloning er molekylærbiologiske prosedyrer som skaper genetisk identiske celler eller organismer som bærer DNA eller genet som er av interesse. Kloning er en teknikk som innebærer innsetting av det interesserte genet eller DNAet i en vektor, replikasjon av det i en vertsbakterie, og produksjon av celler eller organismer som er eksakte kopier av den genetiske sammensetningen. Subkloning er en teknikk som innebærer innsetting av genet av interesse, som allerede er satt inn i en vektor, i en sekundær vektor, replikasjon av den i en vertsbakterie, og produksjon av genetisk identiske kopier av celler eller organismer. Hovedforskjellen mellom kloning og subkloning er at genet av interesse, når det først er ligert inn i en vektor, ved kloning fortsetter kloningsprosessen mens, i subkloning,det allerede klonede genet av interesse skilles fra den opprinnelige vektoren og settes inn igjen i en mottaksvektor og fortsetter prosessen.

INNHOLD

1. Oversikt og nøkkelforskjell

2. Hva er kloning

3. Hva er subkloning

4. Sammenligning side om side - Kloning vs subkloning

5. Sammendrag

Hva er kloning?

Kloning er prosedyren som produserer genetisk identiske organismer eller celler. I naturen skjer kloning i middel til aseksuell reproduksjon. Når det ikke er genetisk rekombinasjon eller endring, får datterceller samme genetiske sammensetning av foreldrene. Prokaryote og eukaryote organismer skaper kloner ved binær fisjon, spirende, mitose, etc. I molekylærbiologi er kloning av gener eller spesifikke fragmenter av DNA en populær metode for å studere strukturen og funksjonen til den spesielle DNA-seksjonen.

Hovedmålet med molekylær kloning er å lage millioner av kopier av genetisk identiske celler eller organismer som bærer DNA-fragmentet av interesse (hovedsakelig gener). Det skaper organismer med eksakte genetiske kopier av en annen. Primært blir spesifikke gener klonet i molekylære studier for å oppnå strukturell og funksjonell informasjon og for DNA-sekvensering. Også for produksjon av spesifikke proteiner eller produkter i stor skala er kloning mye brukt.

Kloningsprosedyre

De grunnleggende trinnene for kloning av prosedyren er som følger.

1. Identifisering og isolasjon av genet av interesse. (Amplifisering av genet av interesse ved PCR).
2. Restriksjonsfordøyelse av genet av interesse (Restriksjonsendonukleas kutt genet).
3. Restriksjonsfordøyelse av vektor-DNA. (Vektor-DNA kuttes også ved bruk av samme restriksjonsendonuklease).
4. Innsetting av genet i vektoren og dannelse av det rekombinante molekylet.
5. Transformasjon av den rekombinante vektoren til en vertsbakterie.
6. Isolering og identifikasjon av de transformerte bakteriene (plasmidvektoren skal inneholde et valgbart gen, oftest et antibiotikaresistensgen for screening av transformerte bakterier).
7. Rekombinant genuttrykk i verten.

Figur_01: Kloningsprosedyre

Hva er Subcloning?

Subkloning er en prosedyre for å flytte et gen av interesse fra en vektor til en annen vektor for å se ekspresjonen av genet for å oppnå den ønskede funksjonaliteten til genet. I denne metoden er to vektorer involvert; nemlig overordnet vektor og destinasjonsvektor. Klonede innsatser flyttes igjen til en andre vektor under subkloning. Målet med å overføre genet fra den første vektoren til den andre vektoren er å oppnå noe som ikke kunne gjøres av den første vektoren eller å skille et gen igjen i det allerede klonede DNA-fragmentet og uttrykke det alene. Begrensningsenzymer brukes i denne prosedyren i begynnelsen.

Fremgangsmåte for underkloning

De grunnleggende trinnene for subkloning er som følger.

1. Ved hjelp av restriksjonsendonukleaser, separasjon av DNA av interesse i donorplasmidet (overordnet vektor).
2. Forsterkning av DNA av interesse ved bruk av PCR.
3. Rensing av PCR-produktet (DNA av interesse) ved gelelektroforese.
4. Åpning av mottakerplasmidet med samme restriksjonsendonukleaser som ble brukt for å skille DNA av interesse i moderplasmidet.
5. Ligering av DNA av interesse (gen) i mottakerplasmidet for å skape det subklonede plasmidet.
6. Transformasjon av den subklonede vektoren til en kompetent vertsbakterie.
7. Screening av transformerte celler.
8. Rensing av plasmid-DNA og bruk for DNA-sekvensering eller ekspresjon av genene for å oppnå de ønskede produktene.

Subkloning utføres ved anledninger med å isolere ett gen fra den klonede gruppen av gener, eller når genet av interesse er nødvendig å overføre til et nyttig plasmid for å se den nøyaktige funksjonen til genet av interesse.

Figur_02: Fremgangsmåte for underkloning

Hva er forskjellen mellom kloning og subkloning?

Diff Article Middle before Table

Kloning vs underkloning
Kloning er prosedyren som produserer genetisk identiske organismer eller celler.	Subkloning er en prosedyre for å flytte et gen av interesse fra en vektor til en annen vektor for å se ekspresjonen av genet for å oppnå den ønskede funksjonaliteten til genet.
Prosess
Separer DNA av interesse fra organismen og sett inn i en vektor en gang og klonet	Allerede klonet DNA skilles fra den første vektoren og settes inn i en andre vektor og klones.
Sett inn bevegelse via vektorer
Flytter ikke innsatser (DNA av interesse) fra en vektor til en annen vektor.	Flytt innlegg fra overordnet vektor til destinasjonsvektor.

Sammendrag - Cloning vs Subcloning

Kloning skaper genetisk identiske celler eller organismer med det innsatte genet eller DNA av interesse. Det fortsetter gjennom separasjon og innsetting av DNA av interesse i en vektor og ekspresjon i en vertsbakterie. Subkloning deler lignende trinn med kloning. Imidlertid blir subkloning av allerede klonet DNA-fragment (gen av interesse) satt inn i en vektor og transformert til en vertsbakterie. Det er nøkkelforskjellen mellom kloning og subkloning.