Nøkkelforskjell - forbigående vs stabil transfeksjon
Transfeksjon er en prosess som er involvert i genoverføring av eukaryote celler ved bruk av kjemiske eller fysiske metoder. Transfeksjon kan klassifiseres i to hovedtyper som heter transient transfeksjon og stabil transfeksjon. Under forbigående transfeksjon, klarer ikke genet av interesse å integrere med vertsgenomet og uttrykkes midlertidig i verten på kort sikt, mens genet av interesse integreres med vertsgenomet i stabil transfeksjon og opprettholdes i lang tid i flere generasjoner. Dette er nøkkelforskjellen mellom forbigående og stabil transfeksjon. I begge tilfeller er transfeksjon vellykket, og gener uttrykkes.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er transient transfeksjon
3. Hva er stabil transfeksjon
4. Sammenligning side om side - Transient vs stabil transfeksjon
5. Sammendrag
Hva er forbigående transfeksjon?
Transfeksjon er et viktig verktøy for å sette inn gener i eukaryote celler. Blant de to typene transfeksjon er transient transfeksjon en vanlig måte i genoverføring. Gjennom en vektor transformeres fremmede gener inne i vertsceller. Når fremmed DNA kommer inn i vertscellen, har den to alternativer. Det kan enten integreres med vertsgenomet og replikere, eller forbli inne uten å integrere i genomet. Transient transfeksjon viser midlertidig ekspresjon av de innsatte gener uten å integrere i vertsgenomet. Gener uttrykker og produserer det kodede proteinet til cellen deler seg. På grunn av manglende evne til integrering kan den imidlertid ikke replikere og inngå fremtidige generasjoner. Denne typen transfeksjon er vellykket i en kort periode. Under celledelingen eller på grunn av noen andre faktorer utsettes fremmed DNA for nedbrytning. Transient transfeksjon er vist når fremmed DNA er i form av sterkt opprullet DNA.
Figur 01: Transient transfeksjon
Hva er stabil transfeksjon?
Stabil transfeksjon viser vellykket utenlandsk genintegrasjon i vertsgenomet. Når fremmed DNA kommer inn i vertscellen, integreres en del av fremmed DNA med vertsgenomet og blir en del av det. Derfor replikerer fremmed DNA også og overføres til fremtidige generasjoner når vertsgenomet replikerer. Denne typen transfeksjon er kompleks og sjelden. På grunn av den stabile transfeksjonen i genomet opprettholdes imidlertid denne egenskapen i en lengre periode på flere generasjoner.
Stabil transfeksjon er en vanskelig prosess og krever en effektiv levering av DNA og celleoppkjøp av fremmed DNA til genomet. Derfor favoriserer lineært DNA stabil transfeksjon enn sirkulært DNA. Imidlertid er stabil transfeksjon hastighet omtrent én av 10 4- transformerte celler. Stabil transfeksjon kan observeres ved cotransfomasjon av en valgbar markør og utføre den kunstige seleksjonen på et medium.
Figur 02: Stabil transfeksjon
Hva er forskjellen mellom forbigående og stabil transfeksjon?
Diff Article Middle before Table
Forbigående mot stabil transfeksjon |
|
| Fremmed DNA integreres ikke i et vertsgenom. | Fremmed DNA integreres med vertsgenomet og blir en del av det. |
| Replikering i verten | |
| Transient transfekterte gener replikeres ikke i verten. Derfor overføres ikke gener til neste generasjoner. | Gener replikeres i verten og overføres til fremtidige generasjoner. |
| Varigheten av genuttrykket | |
| Gener uttrykkes for en begrenset periode, og etter det blir de ødelagt. | Gener blir en del av genomet og uttrykkes i generasjonen i lang tid. |
| Bruk | |
| Dette er nyttig for å studere effekten av kortvarig uttrykk for gener eller genprodukter. | Dette er nyttig for å studere effekten av genuttrykk på lang sikt. |
| Oppdagelse av transfeksjonen | |
| Gener uttrykkes og kan lett oppdages ved å sette inn et reportergen. | Stabil transfeksjon kan lett oppdages ved å sette inn en valgbar markør og velge gjennom kunstig markering på media. |
| Forekomst og prosess | |
| Transient transfeksjon er vanlig og ikke kompleks å utføre. | Stabil transfeksjon er sjelden i forekomst og kompleks å utføre. |
| Naturen til DNA | |
| Svært supercoiled DNA er egnet for transient transfeksjon. | Lineært DNA er egnet for stabil transfeksjon. |
| applikasjoner | |
| Dette brukes til studier av gennedslag eller demping med inhiberende RNA, proteinproduksjon i liten skala | Dette brukes til proteinproduksjon i storskala, langsiktige farmakologiske studier, genterapi, forskning på mekanismene for langsiktig genetisk regulering |
Sammendrag - Transient vs Stable Transfection
Forbigående og stabile transfeksjoner er to typer transfeksjoner vist under genet som overføres til eukaryote celler av ikke-virale baserte systemer. Transformert fremmed DNA er ikke integrert med vertsgenomet i transient transfeksjon mens det integreres med vertsgenomet i stabil transfeksjon. Sirkulært opprullet DNA er vist forbigående transfeksjon mens lineært DNA foretrekker stabil transfeksjon. Dette er forskjellen mellom forbigående og stabil transfeksjon. Imidlertid er forbigående transfeksjon mer vanlig og lett sammenlignet med stabil transfeksjon. Men valget av en av to avhenger av formålet med genoverføringen og varigheten av forskningsprosjektet.
