Nøkkelforskjell - Nitrocellulose vs Nylon Membran
Blotting er en viktig teknikk for påvisning av spesifikke sekvenser av DNA, RNA og proteiner fra deres blandinger i molekylærbiologi. Det gjøres ved hjelp av en membran som heter blot. Det er forskjellige blottingteknikker som nordlig, sørlig og vestlig blotting. Å velge en riktig membran for blottingprosessen bør gjøres nøye for å forhindre uspesifikk binding og feil deteksjoner. Nitrocellulose, nylon og PVDF er ofte brukte membraner i blottingteknikker. De har forskjellige egenskaper. Hovedforskjellen mellom nitrocellulose og nylonmembran er at nitrocellulosemembraner har høyt proteinimmobilisasjonspotensial, mens nylonmembraner har høyt nukleinsyreimmobilisasjonspotensial. Imidlertid brukes begge typer membraner ofte i blottingteknikker.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er en nitrocellulose-membran
3. Hva er en Nylon-membran
4. Sammenligning side om side -Nitrocellulose vs Nylon-membran
5. Sammendrag
Hva er en nitrocellulose membran?
Nitrocellulose-membran er et vanlig membranfilter i nukleinsyre- og protein-blottingteknikker. Den har et høyt proteinbindingspotensial. Derfor er nitrocellulosemembraner mye brukt i western blotting-teknikk. Nitrocellulose-membraner er kompatible med alle hybridiseringsteknikker og viser overlegen bindingskapasitet uten forstyrrelser. Nitrocellulose-membraner er naturlig hydrofile i naturen. De gjør hydrofil interaksjon med molekyler og immobiliserer dem effektivt på membranen. Kommersielle nitrocellulosemembraner er tilgjengelige i to porestørrelser: 0,45 og 0,2 µm.
Figur 01: Nitrocellulosemembran brukt i western blotting
Hva er en nylonmembran?
Nylonmembran er en annen type kommersiell membran som brukes i blottingteknikker. Det brukes alternativt med nitrocellulosemembraner for sørlig og nordlig blotting. Nylonmembraner er ideelle for Southern-blotting enn nitrocellulose på grunn av deres høye affinitet til binding med DNA. På grunn av flere unike trekk ved nylonmembraner, bruker forskere ofte nylonmembraner for sørlig og nordlig blotting i stedet for over nitrocellulosemembran. Nylonmembraner anbefales også for stripping og reprobing, i motsetning til nitrocellulose.
Figur 02: Nylonmembran brukt til sørlig blotting
Hva er forskjellen mellom nitrocellulose og nylonmembran?
Diff Article Middle before Table
Nitrocellulose vs nylonmembran |
|
| Nitrocellulose-membraner er sprø. | Nylonmembraner er mindre sprø. |
| Håndtering | |
| De er vanskelige å håndtere. | De er lette å håndtere. |
| Reprobing | |
| Ikke-støttede nitrocellulosemembraner er vanskelige å reprobe. | Reprobing er enkelt med nylonmembraner. |
| Kompatibilitet med forskjellige lagringsforhold | |
| Nitrocellulose-membraner har mindre styrke til å tåle forskjellige lagringsforhold. | Nylonmembraner reagerer mer robust på forskjellige lagringsforhold. |
| Bruk | |
| Forberedelse er påkrevd. | Prewetting er ikke nødvendig for nylonmembraner. |
| Hydrofil natur | |
| Nitrocellulose membraner er hydrofile i naturen, men er mindre hydrofile enn nylon membraner. | De er svært hydrofile i naturen. |
| Immobiliseringspotensial | |
| Nitrocellulose-membraner har mindre affinitet for nukleinsyrer. Men det har høy affinitet for proteiner. | Nylonmembraner har et høyt bindingspotensial med nukleinsyrer enn nitrocellulosemembraner. |
Sammendrag - Nitrocellulose vs Nylon Membrane
Nitrocellulose og nylonmembraner er spesialark som brukes i blottingteknikk for å reprodusere båndmønsteret på gelen. De muliggjør muligheten for å oppdage en spesifikk sekvens eller et protein fra blandingene ved å immobilisere dem på membranen. Når molekylene er immobilisert på membranen, kan den brukes som et substrat for hybridiseringsanalyse med merkede prober. Nitrocellulose-membran brukes ofte til proteindeteksjon i western blotting-teknikk på grunn av sin høye bindingsaffinitet med proteiner. Nylonmembraner brukes ofte til sørlige og nordlige blotting. Dette er forskjellen mellom nitrocellulose og nylonmembran.
