Nøkkelforskjell - Valgbar markør vs reportergen
Genteknikk brukes til å overføre viktige gener fra organisme til en annen organisme. Innsetting av et fremmed gen i genomet til en annen organisme og gjøre det uttrykt i vertscellen er de vanskeligste trinnene i genoverføring. For å oppdage suksessen med transformasjonsprosessen, brukes en valgbar markør og et reportergen i det rekombinante molekylet. En valgbar markør er en DNA-sekvens eller et gen som uttrykker og velger de transformerte cellene fra de ikke-transformerte cellene. Et reportergen er et annet gen som brukes til å skille transformerte celler og for å kvantifisere eller oppdage hvordan det innsatte genet fungerer i verten. Hovedforskjellen mellom valgbar markør og reportergen er at den valgbare markøren brukes til å skjerme ut de ikke-transformerte cellene og for å signalisere de transformerte cellene mens reportergenet brukes til å kvantifisere nivået av genuttrykk i verten.
INNHOLD
1. Oversikt og nøkkelforskjell
2. Hva er valgbar markør
3. Hva er reportergen
4. Sammenligning side om side - valgbar markør vs reportergen
5. Sammendrag
Hva er en valgbar markør?
I genteknikk settes genet av interesse inn i en passende vektor og transformeres til vertsorganismer. Imidlertid er transformasjonen vellykket bare i de kompetente vertscellene, og det er en mulighet for vertsceller å avvise opptaket av fremmed DNA. Derfor er differensiering av de transformerte og ikke-transformerte cellene viktig for å fortsette med videre eksperimentering. Derfor inkorporerer forskere et valgbart markørgen til vektor for enkelt valg av transformerte celler fra ikke-transformerte celler. En valgbar markør er en DNA-sekvens, spesielt et gen som er nyttig i identifikasjon av de transformerte cellene. Dette markørgenet viser et trekk som passer til et kunstig utvalg av transformerte celler fra ikke-transformerte celler på et medium.
De vanligste valgbare markørene som brukes i molekylærbiologi er antibiotikaresistente gener. Et antibiotikaresistensgen settes inn i vektoren og transformeres til vertsceller, spesielt til vertsbakterien. Det spesielle antibiotikumet er innlemmet i vekstmediet til bakterien. På grunn av tilstedeværelsen av den selektive markøren, under de selektive forholdene, er det bare celler som inneholder riktig valgbar markør som kan overleve. Ikke-transformerte celler klarer ikke å vokse i det antibiotikaholdige mediet. Derfor, på grunn av den valgbare markøren som er antibiotikaresistent, kan transformerte celler lett identifiseres.
Gener som gir egenskaper for antimetabolitter, herbicider brukes som selektive markører i kloningsvektorer i plantegenetikk. Imidlertid har denne samtransformasjonen av selektive markører til genetisk modifiserte organismer negative effekter på miljøet og menneskene. Utslipp av antibiotikaresistente bakterier kan øke antibiotikaresistiviteten til humane patogener. Det kan forurense produktet eller biomassen med antibiotika og kan miste det selektive trykket som et resultat av nedbrytning og inaktivering av antibiotika.
Figur 01: Plasmidvektor for genoverføring med valgbar markør
Hva er en reportergen?
Reportergener er gener som muliggjør påvisning eller måling av det innsatte genuttrykket. Disse reportergenene kan være festet til regulatoriske sekvenser av genet av interesse for å signalisere ekspresjonsplasseringen eller nivåene. Derfor transkriberes de under ekspresjonen av gener under samme promoter til en enkelt mRNA-sekvens og blir deretter oversatt til et protein som kan indikere nivået på genuttrykk.
Reportergener er av forskjellige typer, og de inneholder visuelt identifiserbare egenskaper som vanligvis er involvert i fluorescerende og selvlysende proteiner. Gener som koder fluorescerende protein og enzymer, konverterer usynlige substrater til selvlysende eller fargede produkter ved å signalisere vellykket genuttrykk og gi muligheten for kvantifisering av genuttrykket.
Figur 02: Reportergenekspresjon
Hva er forskjellen mellom valgbar markør og reportergen?
Diff Article Middle before Table
Valgbar markør vs reportergen |
|
| Valgbar markør er en slags DNA-sekvens som hjelper til med å skille transformerte celler med ikke-transformerte celler. | Reportergen er et gen som hjelper til med å kvantifisere ekspresjonen av det ønskede genet satt inn i vertscellen. |
| Produserte enheters art | |
| Gener er kodet med egenskaper som hjelper kunstig seleksjon på voksende medier. | Gener er kodet med visuelt identifiserbare egenskaper. |
| Bruk | |
| Antibiotiske resistensgener, antimetabolittgener, herbicidresistensgener etc. er eksempler på valgbar markør. | Gener koder for grønt fluorescerende protein, β-glukuronidase, Kloramfenikolacetyltransferase, Rødt fluorescerende protein, etc. er eksempler. |
Sammendrag - Valgbar markør vs reportergen
Valgbare markører lar transformerte celler vokse i selektive medier dosert med spesielt antibiotika eller herbicid. De brukes til tidlig valg av transformerte celler. Reportergener brukes til å kvantifisere ekspresjonsnivået til det ønskede genet som er satt inn. De tillater også differensiering av transformerte og ikke-transformerte celler. Dette er forskjellen mellom valgbar markør og reportergen. Både valgbar markør og reportergen blir betraktet som viktige markører innen genteknikk.
